中文名稱：流式細胞術檢測技術服務
中文別名：流式細胞術檢測技術服務
中文別名：流式細胞術檢測技術服務
流式細胞術檢測技術服務
1、檢測項目： (1)細胞周期細胞 （2）細胞凋亡 (3)免疫細胞分型 (4)表面抗原鑒定 (5)細胞內鈣離子檢測 (6)線粒體功能 (7)細胞分選 2、樣本及來源： 1) 單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 說明： 1、 實驗所用的流式細胞儀為COULTER EPICS XL。 2、 送檢樣本量： 1)、單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 3、 用戶需要進行流式細胞儀檢測時須提前預約，同時說明實驗目的、方法等。一次送檢標本數不少于10個。如果一次送檢標本總數不足10個，每個測試費用為標準收費×2。 4、 我公司在正式接受實驗委托一周內交付實驗結果。所提供實驗結果忠實于樣本的實際情況。 5、 用戶須一次性全額預付實驗費。 6、 部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供，；特殊標記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應可與樣本發生特異性識別反應。 7、 由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負責。 8、 請在表中說明檢測具體要求（可另附頁），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負責。 9、 請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負責保存。 客戶提供： （1）標本:組織、細胞、全血（抗凝） （2）抗體（熒光素標記） PE最強，適用于弱表達抗原 FITC最便宜，適用于強表達抗原，適用范圍廣 biotin-avidin不適合 弱抗原的檢測 （3）其他試劑（如Fluo-3） （4）染色試劑盒 附：流式細胞術檢測樣品推薦制備方法： A. 直接標記抗體（FITC標記抗體）： (1) 、收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。 (2) 、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞，800rpm離心5min。 (3) 、用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測即可。 (4) 、用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。 B. 未標記抗體間接免疫熒光標記法： (1)、收集2×106個細胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次，800rpm離心5min。 (2)、用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細胞，800rpm離心5min； (3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。 (4)、加入飽和劑量未標記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細胞，800rpm離心5min，洗去未結合一抗，重復一次。 (5)、加入熒光標記（FITC）標記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。 (6)、加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞；固定待測。 (7)、流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。 C.細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備： (1)、待測樣本制成單細胞懸液，然后2000轉/分離心5分鐘，棄上清。 (2)、用4℃預冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。 (3)、調整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。 (4)、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
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