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雞外周血血小板分離液試劑盒
產(chǎn)品編號(hào):PLA2011C
別名 雞外周血血小板分離液試劑盒 
英文名  
雞外周血血小板分離液試劑盒
中文名稱:雞外周血血小板分離液試劑盒
中文別名:雞外周血血小板分離液試劑盒
產(chǎn)品類別:血小板的分離
 
產(chǎn)品編號(hào):PLA2011C
 
產(chǎn)品名稱:雞外周血血小板分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格:200ml/KIT
 
產(chǎn)品價(jià)格:¥500.00元
 
本品用于分離雞外周血血小板



“XXXX”動(dòng)物外周血血小板分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
技術(shù)文檔編號(hào):TBD0049SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
 
  名稱 產(chǎn)品編號(hào) 規(guī)格
       
A XXXX 動(dòng)物外周血血小板分離液   200ml
       
B 樣本稀釋液(贈(zèng)品) 2010C1119 200ml
       
C 清洗液(贈(zèng)品) 2010X1118 200ml
       
D 說(shuō)明書(shū)   1 份
       
 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
方法一:
 
  • 在 15ml 離心管中,首先取抗凝血加于分離液之液面上(抗凝血與分離液最佳比例 1:2), 250-300g ,離心 15min(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到最佳分離效果)。
 
  • 離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。第一層為血小板血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
 
  • 用吸管小心吸取第一層血小板血漿層到另一 15ml 離心管中,往所得離心管中加入同體積樣本稀釋液(產(chǎn)品編號(hào):2010C1119),混勻血小板(如需獲得的富集血小板血漿則不需加入稀釋液,直接取血漿層即得)。
 
  • 500g,離心 20min,離心后棄上清。
 
  • 向含有血小板沉淀的離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)混勻,離心450g,15min,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸目的細(xì)胞。
方法二(需獲得血小板富集血漿的客戶請(qǐng)勿選擇此方法)
 
1. 在 15ml 離心管中,先加入 4ml 分離液,再將分離液與樣本稀釋液 8:2 混合的液體 1ml
 
小心疊加于分離液之液面上形成梯度界面。
 
  • 將抗凝血液樣本 2-3ml 小心加于分離液之液面上,400g,離心 20min。
 
  • 離心后,環(huán)狀血小板層存在于血漿層中,取血小板層或血漿層(血小板層不明顯時(shí))于另一 15ml 離心管中。
 
  • 后續(xù)試驗(yàn)同方法一中的步驟 5。
 
【注意事項(xiàng)】
 
  • 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
 
  • 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
 
  • 吸取過(guò)多的血小板血漿層下層溶液會(huì)導(dǎo)致交界處單個(gè)核細(xì)胞混雜。
 
  • 分離液用量大于血液樣本時(shí),分離效果更佳。
 
  • 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。
 
【儲(chǔ)存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
 
【參考值(參考范圍)】
 
本實(shí)驗(yàn)血小板提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
 
      紅細(xì)胞   白細(xì)胞   血小板
               
        (4.0-10.0)×109  
  含量(個(gè)/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞 (1.0-3.0)×1011
        50%-70% 20%-40% 3%-8%  
             
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】        
1. 所獲得血小板的酸提取技術(shù)。        
2. 所獲得目的細(xì)胞的鑒定方法        
    A.流式細(xì)胞技術(shù)        

B.免疫組化技術(shù)
 
C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
 
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:
 
出現(xiàn)情況 出現(xiàn)原因 建議解決方案
     
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
   
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
 
     
離心后白環(huán)層彌散 細(xì)胞密度過(guò)大 調(diào)整細(xì)胞密度
   
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn) 細(xì)胞密度過(guò)小
 
     
 
  • 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
 
  • 本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到最佳分離效果,
 
離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。
 
 
 
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